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1.本實驗室利用PCR技術將HBV基因片段呈幾何級數放大,進行PCR產物的基因定序後推斷其胺基酸的種類,以檢驗出患者體內是否有抗藥性病毐株的產生。PCR技術具有高度的靈敏度和特異性,經本實驗室確效,最低偵測極限為1000
IU/mL。若患者體內病毒量小於1000
IU/mL則無法偵測到病毒DNA不能進行其變異型之判讀;若有偵測到HBV病毒的DNA,則經由定序之結果判讀其胺基酸的序列為突變株(YMDD)或非突變株(YVDD或YIDD),以作為臨床醫師用藥之的參考資料。
2.報告內容說明:
Undetected:代表本實驗室方法未偵測到病毒或低於偵測極限
Neagtive:代表為YMDD;氨基酸序列為Tyrosine-Methionine-Aspartic acid-Aspartic acid
YVDD:氨基酸序列為Tyrosine-Valin-Aspartic acid-Aspartic acid
YIDD:氨基酸序列為Tyrosine-Isoleucine-Aspartic acid-Aspartic acid
L528M:Codon528位置氨基酸由Leucine變成Methionine
3.B型肝炎病毐類屬於”Hepadnaviridae”病毐科,具有外套的部份双股DNA,其中有一片段是單鏈DNA,本身含有DNA
polymerase,能夠修補單鏈區域使成為完整雙鏈DNA。HBV的基因大約是3.2kb的DNA。B型肝炎病毐所以會造成肝臟的傷害,是因為它誘發宿主的免疫反應而造成肝臟的發炎及壞死。因此如能抑制病毐的繁殖甚至清除病毐,就能減輕或終止肝臟的發炎或壞死,進而避免發展為慢性肝炎及肝硬化,也可以減少肝癌的發生。肝安能(Zeffix
)為抗B型肝炎病毐的使用藥物之一,其主要成份為Lamivudine(拉美夫錠)。此藥本為治療愛滋病,後來發現可以抑制B型肝炎病毐複製。Lamivudine為第一個通過美國FAD核准使用於慢性B型肝炎治療的核苷類似物。Lamivudine須由感染的細胞吸收進入細胞內,再磷酸化成為Lamivudine
triphosphate 後才有抑制病毐的作用。其主要作用機轉為(1)競爭性的抑制B型肝炎病毐的反轉錄酶(2)Lamivudine會併入HBV
DNA的合成鏈中,阻斷DNA進一步的延長,導致DNA合成中斷。每日服用Lamivudine二週可抑制97%的HBV
DNA。但是Lamivudine用一段時間後,有些帶原者身上的B型肝炎病毐會在DNA上變異,用以逃避藥物的抑制作用,此為抗藥性病毐株的產生。根據研究指,在B型肝炎病毐的第552個氨基酸methionine會被Valin或
isoleucine所取代;也就是說原本氨基酸序列為Tyrosine-Methionine-Aspartic acid-Aspartic
acid 將轉變成Tyrosine-Valin-Aspartic acid-Aspartic acid
或是Tyrosine-Isoleucine-Aspartic acid-Aspartic
acid。因為氨基酸的縮寫Tyrosine:Y;Methionine:M;Aspartic
acid:D:Valin:V;Isoleucine:I,因此非突變株的基酸組合為:YMDD,而具抗藥性突變株的氨基酸組合為:YVDD或YIDD。此突變種發生的機率也隨著Lamivudine期間的增長而增加,其發生機率服藥一年後是18%,二年後是41%,三年後是53%;四年後是67%。縱使YMDD突變型B型肝炎病毐出現,仍明顯有較低的HBV
DNA,ALT及AST下降且改善肝臟組織。因此YMDD突變型B型肝炎病毐己在體內型成,持續使用此藥,仍可以抑制殘餘的原始型病毐,而且YMDD突變型B型肝炎病毐的複製競爭力似乎較弱,因此產生的毐性較原始型B型肝炎病毐為低每個胺基酸都有其相對應的DNA,也就是說DNA的排列順序將決定胺基酸的種類,所以DNA序列的改變,會產生胺基酸的改變,因此只要測定B型肝炎病毐本的DNA序列,利用PCR方法即可推斷其胺基酸的種類,檢驗出患者體內是否有抗藥性病毐株的產生。
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